實時熒光PCR試劑盒使用注意事項
瀏覽次數:610發布日期:2021-10-08
實時熒光PCR試劑盒該染料與雙鏈DNA結合后,能夠產生強度高于SYBR Greenl的熒光。結合了以下諸多優勢:熱啟動酶、優化的緩沖液、*熒光染料,可有效地提高mRNA表達水平檢測的可靠性、重復性和靈敏度。qPCRmix為即用型的2x預混母液,該混合母液經過處理,穩定性高,主要包含:雙鏈DNA結合染料、熱啟動酶、MgCl2、dNTPs、反應緩沖液,可確保產生實時定量PCR結果。
實時熒光PCR試劑盒使用注意事項:
1.保存
未拆封的試劑盒,請于-20℃保存;拆封之后,應在4℃保存。在試劑消耗量較少的實驗室,可以考慮將試劑盒的按照組分單獨分裝,后保存在-20℃。
2.配置
試劑盒內所含各組份都是混合物,在靜置情況下會發生分層現象,因此,試劑盒現配現用,震蕩混勻,避免反復凍融,避免預混。其中,反復凍融將大幅縮短試劑盒使用壽命。在擴增體系的選擇時,盡量選擇標準體系,再根據檢材情況加入模板,之后切勿忘記以PCR用水補足擴增體系。
3.切勿預混因試劑盒中酶的活性較高,將各組份按照比例混合之后,即使沒有達到它的合適溫度,但也可能發生與引物結合,導致實驗結果出現丟位點或者雜合子純化等情況。
4.陰陽性參照
實驗結果會受提取、擴增和電泳等多個環節的影響,因此,每次擴增實驗都應該添加一組陰陽性參照。這樣,當結果異常的時,我們就可以結合陰陽性參照的表現,排查問題出在哪個環節。
實時熒光PCR試劑盒特點:
1.高靈敏度:可定量檢測低拷貝靶基因。
2.穩定性增強。
3.靈敏度更高,Ct值更小,對PCR反應具有更小的抑制作用。
4.熱啟動酶性能強勁、可靠。